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NP40裂解液（帶抑制劑）

簡要描述：NP40裂解液（帶抑制劑）對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用，有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。

產(chǎn)品型號：AP01L054
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
更新時間：2024-08-06
訪問量：2142

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蛋白與免疫

免疫磁珠蛋白制備蛋白定量蛋白電泳轉(zhuǎn)模&封閉抗體孵育顯色成像免疫組化

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詳細介紹

品牌	其他品牌	CAS	/
分子式	/	純度	/
分子量	/	貨號	AP01L054
規(guī)格	100ml	供貨周期	現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域	生物產(chǎn)業(yè)

NP40裂解液（帶抑制劑）

產(chǎn)品描述
　　NP40裂解液（帶抑制劑）是一種比較溫和的細胞組織裂解液，主要成分為50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制。對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用，有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。適用于常規(guī)的Western、IP和co-IP等實驗蛋白樣品的制備。
訂購信息

產(chǎn)品名稱	貨號	規(guī)格	價格
NP40裂解液（帶抑制劑）	AP01L054	100 mL	228

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品組成	包裝規(guī)格
AP01L054	NP40裂解液	100 mL
	磷酸酶抑制劑	2*1 mL
	PMSF	1 mL
	產(chǎn)品說明書	一份

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質(zhì)期一年。
使用方法

1.對于培養(yǎng)細胞樣品

(1) 融解NP-40裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。

(2) 細胞裂解

對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2秒后，細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照6孔板每孔細胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液，混勻，充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50~100萬細胞/管，然后再裂解。具體NP-40裂解液的使用量參照表1。

(3) 充分裂解后，10000~14000rpm離心3~5 min，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2. 對于組織樣品
(1) 把組織*切成細小的碎片；
(2) 融解NP-40裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20 mg組織加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項

1.用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品，含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定蛋白濃度。
2.通常6孔板每孔細胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。
3.如果組織樣品本身非常細小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。

然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

表1; NP-40裂解液的使用量

樣品種類	樣品來源	收獲細胞數(shù)	RIPA用量	可制備樣品數(shù)
細胞	6孔板	2.5*106	150-250 μL	400-600
	60 mm培養(yǎng)板	5.2*106	300-500 μL	200-300
	90 mm培養(yǎng)板	12.2*106	500-1000 μL	100-200
	25 cm²培養(yǎng)瓶	5*106	300-500 μL	200-300
	75 cm²培養(yǎng)瓶	2*107	1000-2000 μL	50-100
組織	20 mg組織塊		150-250 μL	400-600

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