溶酶體染色試劑盒實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作
更新時(shí)間:2018-04-10 點(diǎn)擊次數(shù):1543
染色工作液配制實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將試劑盒內(nèi)各組分從冰箱內(nèi)取出,置于室溫回溫15~20min。其中X-Gal溶液C置入冰槽里等待溶化。根據(jù)以下染色工作液配方表(表1),實(shí)驗(yàn)體系類(lèi)型,檢測(cè)樣本數(shù),統(tǒng)一配制單次實(shí)驗(yàn)需要的染色工作液總量。混勻后,置入37ºC恒溫水槽里預(yù)熱,即為染色工作液。
溶酶體染色試劑盒是細(xì)胞控制其生長(zhǎng)潛能的保障機(jī)制一般含義是復(fù)制衰老(Replicative senescence,RS),指正常細(xì)胞經(jīng)過(guò)有限次數(shù)的分裂后,停止分裂,此時(shí)細(xì)胞雖然是存活的,但是細(xì)胞形態(tài)和生理代謝活性發(fā)生明顯變化的現(xiàn)象。體外衰老細(xì)胞研究常用的生物學(xué)特征包括不可逆的生長(zhǎng)停滯;)與衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶senescence associated β-galactosidase, SA β-gal)的活化。作為溶酶體內(nèi)的水解酶,通常在pH 4.0的條件下表現(xiàn)活性。但是衰老細(xì)胞內(nèi)其在pH 6.0的條件下表現(xiàn)活性,且隨著傳代次數(shù)的增加,細(xì)胞群體中表現(xiàn)衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶的細(xì)胞數(shù)目逐漸增加。
溶酶體染色試劑盒注意事項(xiàng),為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,本試劑盒固定液B存在一定的腐蝕性和毒性,操作時(shí)請(qǐng)注意小心防護(hù)。染色液E剛剛?cè)芙夂髸?huì)觀察到有沉淀,屬正常現(xiàn)象,充分混勻或者漩渦震蕩可促使沉淀全部溶解,之后用于染色實(shí)驗(yàn)。X-Gal溶液需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。染色后的細(xì)胞樣品可以在 4ºC冰箱保存,但也需避免光照。細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性強(qiáng),孵育3 h即顯示陽(yáng)性;細(xì)胞β-半乳糖苷酶活性弱,則需要孵育24 h。細(xì)胞染色zui長(zhǎng)孵育時(shí)間為 24 h。細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色的部位即為衰老細(xì)胞特異性β-半乳糖苷酶活性部位。細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色反應(yīng)依賴于特定的pH值,不能用于細(xì)胞培養(yǎng)的CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行染色反應(yīng)。因?yàn)镃O2培養(yǎng)箱中較高濃度的CO2會(huì)影響染色工作液的pH值,導(dǎo)致染色失敗。本試劑盒適合各種類(lèi)型和規(guī)格的培養(yǎng)細(xì)胞:載玻片,載玻片培養(yǎng)皿,35 mm 培養(yǎng)皿和各種孔數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)板,只需按照一定的比例調(diào)整工作液用量即可。